轉(zhuǎn)座因子是存在于染色體DNA上可以自主復(fù)制和位移的基本單位。轉(zhuǎn)座因子不同于質(zhì)粒等一些可移動的因子,當質(zhì)粒或某些病毒遺傳物質(zhì)成為宿主染色體一部分后,它們是隨著染色體復(fù)制.是被動的,轉(zhuǎn)座因子不但可以在一條染色體上移動,而且可以從一條染色體跳到另一條染色體上,從一個質(zhì)粒跳到另一個質(zhì)?;蛉旧w上,甚至可以從一個細胞跑到另一個細胞。轉(zhuǎn)座因子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移過程稱為轉(zhuǎn)座作用.在原核生物和真核生物中普遍存在.并通過缺失、插入、移動、交換等形式直接或間接地促進DNA重組事件的發(fā)生。因此在代謝工程操作中,常將外源基因插在轉(zhuǎn)座因子內(nèi)部,利用所形成的重組轉(zhuǎn)座因子將外源基因帶到宿主細胞染色體的某些位點上。與同源染色體重組相比,細胞中轉(zhuǎn)座因子作用的頻率卻要低得多,不過它在構(gòu)建突變體方面有重要意義。
目前已鑒定了多種轉(zhuǎn)座因子,其中zui簡單的結(jié)構(gòu)形式被命名為插入順序(insertion se—quence,IS)。IS元件是細菌染色體和質(zhì)粒正常的組成部分,其結(jié)構(gòu)均含有用于轉(zhuǎn)座的蛋白質(zhì)(轉(zhuǎn)座酶)、編碼基因(轉(zhuǎn)座基因)以及位于兩端的末端反向重復(fù)序列。有些轉(zhuǎn)座因子除了編碼轉(zhuǎn)座酶外,還含有耐藥性等其他基因,這種復(fù)合型的轉(zhuǎn)座因子稱為轉(zhuǎn)座子(transposon,Tn)。
轉(zhuǎn)座因子在雙鏈DNA上的插入模式如下:首先在插入位點左右兩側(cè)形成兩個交叉的缺刻(nick),然而由核酸外切酶切出相應(yīng)的缺口(gap);雙鏈轉(zhuǎn)座子插入到這兩個缺口之間,并與新產(chǎn)生的單鏈末端連接在一起;zui后修復(fù)轉(zhuǎn)座位點處的缺口。交叉末端結(jié)構(gòu)的形成是所有轉(zhuǎn)座形式的共同特征,但就轉(zhuǎn)座子的來源不同.轉(zhuǎn)座過程可以分為以下三種情況。細胞
(1)復(fù)制型轉(zhuǎn)座在轉(zhuǎn)座過程中,轉(zhuǎn)座元件首先被復(fù)制一次,其復(fù)制拷貝整合在染色體上。整個過程涉及兩類酶的活性,即用于轉(zhuǎn)座元件的轉(zhuǎn)座酶和作用于拷貝元件的解離酶。
(2)非復(fù)制型轉(zhuǎn)座 該轉(zhuǎn)座過程只需要轉(zhuǎn)座酶,轉(zhuǎn)座元件作為一個整體直接從一處轉(zhuǎn)移到另一處,而原來的地方形成DNA斷裂。如果宿主細胞的DNA修復(fù)系統(tǒng)能及時識別并修復(fù),則轉(zhuǎn)座是成功的,否則便是致死型轉(zhuǎn)座。
(3)保守型轉(zhuǎn)座 這是另一類非復(fù)制型的轉(zhuǎn)座形式,轉(zhuǎn)座元件從供體部位被切除并通過一系列的過程插入到靶部位,在該過程中每個核苷鍵皆被保留。
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